TAIL-PCR即交错式热不对称PCR，是一种染色体步移技术。该技术通过3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环，利用不同的退火温度选择性地扩增目标片段，所获得的片段可以直接用做探针标记和测序模板。

• 中文名

• 交错式热不对称PCR

• 外文名

• Tail PCR

• 类型

• 染色体步移技术

• 原理

• 是根据已知 DNA 序列

1. 1定义

2. 2原理

3. 3应用

4. 4实际操作注意事项

TAIL-PCR（thermal asymmetric interlaced PCR），即交错式热不对称PCR，是一种染色体步移技术（Chromosome Walking）。该技术通过3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环，利用不同的退火温度选择性地扩增目标片段，所获得的片段可以直接用做探针标记和测序模板。

是根据已知 DNA 序列，分别设计三条同向且退火温度较高的特异性引物（SP Primer），与经过独特设计的退火温度较低的兼并引物（可以设计多条，AP1、AP2、AP3……）， 进行热不对称 PCR 反应。通常情况下，其中至少有一种兼并引物可以与特异性引物之间利用退火温度的差异进行热不对称 PCR 反应，一般通过三次嵌套PCR 反应即可获取已知序列的侧翼序列。如果一次实验获取的长度不能满足实验要求时，还可以根据第一次步移获取的序列信息，继续进行侧翼序列获取。

tail-pcr流程图

1. 根据已知的基因或分子标记连续步移，获取人、动物和植物的重要调控基因，可以用于研究结构基因

的表达调控。如分离克隆启动子并对其功能进行研究；

2. 步查获取新物种中基因的非保守区域，从而获得完整的基因序列；

3. 鉴定 T-DNA 或转座子的插入位点，鉴定基因枪转基因法等转基因技术所导致的外源基因的插入位点等；

4. 用于染色体测序工作中的空隙填补，获得完整的基因组序列；

5. 用于人工染色体 PAC、YAC 和 BAC 的片段搭接。

对于基因组测序已经完成的少数物种（如人、小鼠、线虫、水稻、拟南芥等）来说，可以轻松地从数据

库中找到某物种已知序列的侧翼序列。但是，对于大多数生物而言，在不了解它们的基因组序列以前，

想要知道一个已知区域两侧的 DNA 序列，只能采用染色体步移技术。 以 PCR 技术为基础的染色体步移的主要问题是在预先不了解未知区域序列信息的情况下，如何设计两个特异性引物来扩增未知区域。

引物设计原则：根据我的经验和参照TAKARA walking kit，每个特异性引物为24-26个碱基，Tm：64-65℃，GC：44-55% 。这样你可以同时做多个不同的TAIL PCR。

在第一轮PCR结束之后，将PCR产物稀释1000倍（视情况而定）作为第二轮PCR的模板，第二轮PCR的产物同样稀释1000倍（视情况而定）作为第三轮PCR的模板，这样依次类推。实际操作中可以搞3轮甚至更多，当然做3轮是比较合适了，这个时候PCR的产物已经是高度特异性了。

测序：有好多资料说TAIL-PCR的产物可以直接用来测序，但是好多情况下测的并不是很好，比较好的方法是将PCR产物进行TA克隆，然后进行测序

• 参考资料

• 
  

• 1.tail-pcr